domingo, 3 de noviembre de 2013

EFECTO DEL ESTRÉS OXIDATIVO SOBRE LA EXPRESIÓN Y ACTIVIDAD DE TRANSPORTADORES DE L-ARGININA EN ENDOTELIO FETAL HUMANO


RESUMEN
El estrés oxidativo juega un papel clave en la fisiopatología de las enfermedades vasculares tales como hipertensión, aterosclerosis, diabetes mellitus y cardiomiopatías. Esto ocurre cuando aumentan los niveles intracelulares deespecies reactivas derivadas del oxígeno (ROS), disminuyendo la biodisponibilidad del óxido nítrico (NO), un vasodilatador sintetizado a partir de L-arginina. Este aminoácido se incorpora en las células endoteliales a través de transportadores de aminoácidos catiónicos (hCAT-1 y hCAT-2B). Los efectos de ROS sobre la actividad y/o expresión de hCATs aun no han sido caracterizados en detalle. Nuestro objetivo fue determinar el efecto de la incubación crónica con peróxido de hidrógeno (H2O2) en la expresión de hCATs y transporte de L-arginina en endotelio humano.
Las células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC) se cultivaron hasta pasaje 2 y fueron tratadas (24h) con H2O(10-12-10-3 M). Los niveles de mRNA de hCAT-1, hCAT2B y 28S fueron determinados por RT-PCR. La abundancia de proteínas de hCAT-1 se determinó por western blotLa captación de L-arginina (100µM) y la cinética de transporte de L-arginina (31,25-1000 µM) se determinó usando L-[3H] arginina en mezcla con L-arginina “fría”. 
Los resultados mostraron que el H2Oaumentó (p<0,05) los niveles de mRNA de hCAT-1 y hCAT-2B. Por otra parte, H2O2 disminuyó (p<0,05) la abundancia de proteína hCAT-1 y la captación de L-argininaAl realizar ensayos de transporte de L-arginina utilizando un amplio rango de concentraciones de este aminoácido fue posible determinar que H2O2 disminuye la Vmax, mientras que la Km aparente de transporte se mantuvo sin cambios significativos. 

ABSTRACT
            Oxidative stress plays a key role in vascular diseases such as hypertension, atherosclerosis, diabetes mellitus and cardiomyopathy. This occurs when intracellular levels of reactive oxygen species (ROS) increase, decreasing the bioavailability of nitric oxide (NO), a vasodilator synthesized from L-arginine. This amino acid is incorporated into endothelial cells by cationic amino acid transporters (hCAT-1 and hCAT-2B). The effects of ROS on activity and/or expression of hCATs are not fully understood. Our aim was determine the effects of chronic incubation with hydrogen peroxide (H2O2) on hCATs expression and L-arginine transport in human endothelium.
            Endothelial cells from human umbilical vein (HUVEC) were cultured to passage 2 and treated (24 h) with H2O2 (10-12-10-3 M).The mRNA levels of hCAT-1, hCAT-2B and 28S were determined by RT-PCR.The protein abundance of hCAT-1 was determined by western blot. L-Arginine uptake (100 µM) and kinetic parameters of L-arginine transport (31,25-1000 µM) was determined using L-[3H]arginine mixed with “cold” L-arginine.
            Results showed that H2O2increased (p<0.05) the mRNA levels of hCAT-1 and hCAT-2B. In the other hand,H2O2 decreased (p<0.05) the abundance of hCAT-1 protein and L-arginine uptake. When testing L-arginine transport using a wide range of concentrations of this amino acid was possible to determine that H2Odecreases Vmax, whereas the apparent Kof L-arginine transport was maintained without significant changes.

Resumen de Tesis para obtener el título de Bioingeniera de Pamela Careaga, Universidad de Concepción, 2012.

No hay comentarios:

Publicar un comentario